Trypanobójcze dzia¿anie przeciwcia¿ przeciwko rekombinowanej tubulinie T. brucei

T. b. brucei alfa i beta tubuliny eksprymowano w E. coli przy u¿yciu plazmidu ekspresyjnego pTrP2 i kwasu 3-¿-indoloakrylowego jako induktora. Wyräone tubuliny analizowano metod¿ SDS-PAGE i potwierdzano metod¿ Western blot, w której miäy identyczn¿ pozorn¿ mas¿ cz¿steczkow¿ 50 kDa. Wyräone tubuliny indywidualnie rozpuszczono w 8 M moczniku i rozcie¿czono 20-krotnie, po czym zat¿¿ono i ekstensywnie dializowano wobec buforu MES. Po dializie ¿rednia wydajno¿¿ zarówno dla tubuliny alfa, jak i beta wynosi¿a 0,7 g na litr kultury. Przeciwciäa poliklonalne wytworzono u kädego z 56 królików immunizowanych trzema dawkami st¿¿onych tubulin w ilo¿ci 150 ¿g lub 450 ¿g na immunizacj¿ na zwierz¿. Wp¿yw tych przeciwciä na T. b. wzrost brucei badano przez hodowanie T. b. brucei tworz¿ do 25% surowic odporno¿ciowych wyhodowanych przez królika. Surowice odporno¿ciowe innych królików nie hamowäy rozwoju T. b. wzrost brucei w kulturze. Wyniki te pokazuj¿, ¿e przeciwciäa przeciwko wyräanej w bakteriach tubulinie trypanosomu mog¿ nie by¿ cytotoksyczne dla T. b. brucei.